Der Giotto Saal, welcher den toskanischen Malern aus dem 13. und 14. Jahrhundert gewidmet ist, stellt die ältesten Gemälde der Uffizien aus.
Durch den Vergleich der drei großen Altargemälde, die dasselbe Motiv zeigen,die Maestà - die Jungfrau Maria sitzt auf einem Thron mit dem Jesuskind auf ihrem Schoß - die von den drei Künstlern Duccio di Buoninsegna, Cimabue und Giotto, wird dem Besucher die Möglichkeit gegeben, die Entwicklung von der alten Gotik und dem byzantinischen Stil zu einer "moderneren" Wahrnehmung des Raumes und des menschlichen Körpers nachzuvollziehen.
Unter den anderen Werken befinden sich ebenfalls zwei Kreuzigungen von zwei toskanischen Malern, deren Namen unbekannt sind, sowie des Badia Fiorentina Polyptychon von Giotto.